優(yōu)化反應(yīng)條件

• 調(diào)整反應(yīng)溫度：適當(dāng)升高反應(yīng)溫度可以加快反應(yīng)速率，但過(guò)高的溫度可能導(dǎo)致慶大霉素或 FITC 變性失活，一般來(lái)說(shuō)，37℃-45℃是比較適宜的反應(yīng)溫度范圍，在該溫度下既能保證一定的反應(yīng)速率，又能維持兩者的活性.

• 控制反應(yīng)時(shí)間：延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間通?？梢允垢嗟?FITC 與慶大霉素結(jié)合，但反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也可能會(huì)增加副反應(yīng)的發(fā)生幾率，導(dǎo)致標(biāo)記效率不再提高甚至下降。需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定最佳反應(yīng)時(shí)間，一般反應(yīng)時(shí)間在 2-24 小時(shí)之間，比如在 4℃下反應(yīng) 24 小時(shí)或在 37℃下反應(yīng) 2-4 小時(shí).

• 調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的 pH 值：不同的 pH 值會(huì)影響 FITC 和慶大霉素分子上活性基團(tuán)的解離狀態(tài)，進(jìn)而影響兩者的反應(yīng)活性。通常，pH 值在 8.0-9.0 之間時(shí)，F(xiàn)ITC 的異硫氰酸基團(tuán)和慶大霉素的氨基等活性基團(tuán)的反應(yīng)活性較高，有利于提高標(biāo)記效率.

選擇合適的反應(yīng)溶劑

• 使用有機(jī)溶劑與緩沖液的混合溶劑：有機(jī)溶劑如二甲基亞砜（DMSO）、N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）等可以增加慶大霉素和 FITC 的溶解性，使兩者更好地接觸反應(yīng)，但有機(jī)溶劑的比例不宜過(guò)高，否則可能會(huì)影響慶大霉素和 FITC 的活性以及反應(yīng)體系的穩(wěn)定性，一般有機(jī)溶劑的體積分?jǐn)?shù)可控制在 10%-30% 左右，同時(shí)加入適量的緩沖液來(lái)維持反應(yīng)體系的 pH 值穩(wěn)定。

• 選擇合適的緩沖液體系：常用的緩沖液有磷酸鹽緩沖液（PBS）、碳酸鹽緩沖液等，不同的緩沖液對(duì)標(biāo)記反應(yīng)的影響可能有所不同，需根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。例如，碳酸鹽緩沖液在 pH 值為 8.0-9.0 時(shí)具有較好的緩沖能力，有利于提高標(biāo)記效率.

確定合適的 FITC 與慶大霉素的摩爾比

• 增加 FITC 的相對(duì)用量：適當(dāng)提高 FITC 與慶大霉素的摩爾比，可以使慶大霉素分子上更多的活性基團(tuán)與 FITC 結(jié)合，從而提高標(biāo)記效率，但 FITC 過(guò)量過(guò)多可能會(huì)導(dǎo)致未反應(yīng)的 FITC 難以去除干凈，產(chǎn)生較高的背景熒光，影響后續(xù)的檢測(cè)和應(yīng)用，一般 FITC 與慶大霉素的摩爾比可在 5:1-20:1 之間進(jìn)行優(yōu)化選擇.

去除未反應(yīng)的 FITC

• 柱層析法：可選用凝膠過(guò)濾柱層析、離子交換柱層析等方法，根據(jù) FITC - 慶大霉素與未反應(yīng)的 FITC 在分子大小、電荷性質(zhì)等方面的差異進(jìn)行分離純化，從而去除未反應(yīng)的 FITC，提高標(biāo)記產(chǎn)物的純度和標(biāo)記效率，但柱層析法操作相對(duì)復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，且可能會(huì)造成一定程度的樣品損失.

• 超濾法：利用超濾膜的截留作用，將分子量較大的 FITC - 慶大霉素截留，而讓未反應(yīng)的小分子 FITC 透過(guò)超濾膜，從而達(dá)到去除未反應(yīng) FITC 的目的，該方法操作簡(jiǎn)單、快速，且可以在常溫下進(jìn)行，對(duì)樣品的活性影響較小，但需要選擇合適截留分子量的超濾膜，以確保有效去除未反應(yīng)的 FITC，同時(shí)避免 FITC - 慶大霉素的損失.

對(duì)慶大霉素進(jìn)行預(yù)處理

• 純化慶大霉素：使用前對(duì)慶大霉素進(jìn)行進(jìn)一步純化，去除其中可能存在的雜質(zhì)和鹽分，以提高其純度，減少雜質(zhì)對(duì)標(biāo)記反應(yīng)的干擾，使慶大霉素能夠更充分地與 FITC 接觸反應(yīng)，從而提高標(biāo)記效率 。

• 對(duì)慶大霉素進(jìn)行活化：通過(guò)化學(xué)修飾等方法對(duì)慶大霉素分子上的活性基團(tuán)進(jìn)行適當(dāng)活化，使其更容易與 FITC 發(fā)生反應(yīng)，例如可以采用一些活化試劑對(duì)慶大霉素的氨基等基團(tuán)進(jìn)行預(yù)處理，增強(qiáng)其親核性，從而提高標(biāo)記效率，但該方法需要注意活化試劑的選擇和反應(yīng)條件的控制，以避免對(duì)慶大霉素的活性和結(jié)構(gòu)造成過(guò)大影響 。

關(guān)于我們:

陜西星貝愛(ài)科生物科技經(jīng)營(yíng)的產(chǎn)品種類包括有：合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性納米顆粒、納米金及納米金棒、近紅外熒光染料、活性熒光染料、熒光標(biāo)記物、蛋白交聯(lián)劑、小分子PEG衍生物、點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)品、樹枝狀聚合物、環(huán)糊精衍生物、大環(huán)配體類、熒光量子點(diǎn)、透明質(zhì)酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳納米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二氧化硅，聚合物微球，近紅外熒光染料，聚苯乙烯微球，上轉(zhuǎn)換納米發(fā)光顆粒，MRI核磁造影產(chǎn)品，熒光蛋白及熒光探針等等。

溫馨提示：供應(yīng)產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體！

相關(guān)產(chǎn)品：

FITC-海藻糖,FITC-Trehalose

Cy3-葛根素,CY3-Puerarin

FITC-傳明酸,FITC-Tranexamic Acid

Cy5.5-HRP,Cyanine5.5-辣根過(guò)氧化物酶

CY5.5-L-酪氨酸,CY5.5-L-Tyrosine

Cy5.5-油酸,CY5.5-Oleic acid

Cy5.5-γ-氨基丁酸，cy5.5-4-Aminobutyric acid

Cy5.5-L-色氨酸，cy5.5-L-Tryptophan

羅丹明-海藻酸鈉，Rhodamine-Sodium alginate