FITC-氨甲環(huán)酸|FITC-Tranexamic Acid

1.熒光光譜分析

激發(fā)和發(fā)射波長檢測：使用熒光分光光度計對 FITC - 氨甲環(huán)酸進行檢測。FITC 的典型激發(fā)波長在 490 - 495nm 之間，發(fā)射波長在 520 - 530nm 左右。如果標記成功，當用 490 - 495nm 的光激發(fā)時，應該能檢測到 520 - 530nm 的熒光發(fā)射峰。并且可以將標記后的化合物與未標記的 FITC 和氨甲環(huán)酸分別進行比較，未標記的氨甲環(huán)酸在相應波長范圍內(nèi)不應有熒光發(fā)射，而標記后的化合物熒光強度應明顯高于未標記的氨甲環(huán)酸，從而驗證 FITC 是否成功連接到氨甲環(huán)酸上產(chǎn)生熒光。

熒光強度定量：除了檢測波長，還可以比較不同濃度的 FITC - 氨甲環(huán)酸溶液的熒光強度。一般來說，在一定范圍內(nèi)，隨著 FITC - 氨甲環(huán)酸濃度的增加，熒光強度應該呈線性增加。通過制作標準曲線，即繪制熒光強度與濃度的關(guān)系曲線，將實測樣品的熒光強度代入標準曲線中，可以估算標記產(chǎn)物的濃度，也可以驗證標記的一致性和穩(wěn)定性。

2.紫外 - 可見吸收光譜分析

FITC 在紫外 - 可見區(qū)域有特征吸收峰，通常在 490 - 495nm 附近，這與它的激發(fā)波長相近。通過紫外 - 可見分光光度計測量 FITC - 氨甲環(huán)酸的吸收光譜，若在該波長附近出現(xiàn)吸收峰，且吸收強度與熒光強度變化趨勢相關(guān)（即隨著標記程度的增加，吸收峰強度增加），可以作為標記成功的一個佐證。同時，將其與未標記的氨甲環(huán)酸和 FITC 進行對比，未標記的氨甲環(huán)酸在該波長區(qū)域通常沒有明顯吸收峰，這樣可以更清楚地驗證 FITC 與氨甲環(huán)酸的結(jié)合。

3.高效液相色譜（HPLC）分析

保留時間對比：使用 HPLC 對 FITC - 氨甲環(huán)酸、未標記的 FITC 和氨甲環(huán)酸進行分離和分析。由于 FITC - 氨甲環(huán)酸的結(jié)構(gòu)與未標記的化合物不同，它在色譜柱中的保留時間也會不同。通過比較標記前后化合物的保留時間，可以判斷標記是否成功。一般來說，FITC - 氨甲環(huán)酸的保留時間會介于 FITC 和氨甲環(huán)酸之間，或者與兩者都不同，這取決于它們的化學結(jié)構(gòu)和色譜柱的性質(zhì)。

純度檢測：HPLC 還可以用于檢測 FITC - 氨甲環(huán)酸的純度。如果標記過程中有未反應的 FITC 或氨甲環(huán)酸，或者產(chǎn)生了其他雜質(zhì)，在色譜圖上會出現(xiàn)相應的峰。純度較高的 FITC - 氨甲環(huán)酸應該只有一個主峰，且峰形良好，通過計算主峰面積占總峰面積的比例可以確定其純度，從而驗證標記的質(zhì)量。

4.質(zhì)譜（MS）分析

分子量測定：通過質(zhì)譜分析可以準確測定 FITC - 氨甲環(huán)酸的分子量。FITC 的分子量約為 389.38Da，氨甲環(huán)酸的分子量約為 157.21Da，標記后的化合物分子量應該是兩者分子量之和減去一個水分子的分子量（因為反應過程中有一個水分子生成），即約為 546.59Da。如果質(zhì)譜結(jié)果顯示的分子量與理論計算值相符，說明標記成功。

碎片離子分析：質(zhì)譜還可以分析 FITC - 氨甲環(huán)酸的碎片離子，通過比較碎片離子的質(zhì)荷比和豐度與理論推測的結(jié)果，可以進一步驗證化合物的結(jié)構(gòu)，確定 FITC 與氨甲環(huán)酸的連接方式是否正確。

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